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Mycoplasma Detection Kit with UDG PCR Mix and loading Dye (MB000-1591)

Mycoplasma Detection Kit with UDG PCR Mix and loading Dye (MB000-1591)

支原體檢測(cè)試劑盒

貨號(hào)

規(guī)格

MB000-1591

48 rxn

MB000-1592

96 rxn

概述 性能 相關(guān)產(chǎn)品 應(yīng)用 圖片 數(shù)據(jù)及文件 文獻(xiàn) Q&A COA

支原體(mycoplasma):又稱(chēng)霉形體,為目前發(fā)現(xiàn)的最小的最簡(jiǎn)單的原核生物,估計(jì)有15%~35%的細(xì)胞被支原體污染。支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞造成多方面的影響,包括代謝、免疫或生化特性、生長(zhǎng)狀況、以及細(xì)胞存活等多方面的改變,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性、可靠性和準(zhǔn)確性;支原體難以檢測(cè),同時(shí)也很難消除,其能輕易地通過(guò)0.22μm標(biāo)準(zhǔn)濾膜,同時(shí)也能拮抗絕大多數(shù)的抗生素,給細(xì)胞培養(yǎng)造成巨大損失。因此細(xì)胞都需要定期(如每2~3個(gè)月)進(jìn)行支原體污染的檢測(cè)。許多方法可用于檢測(cè)支原體,包括肉湯或瓊脂培養(yǎng),直接或間接的熒光染色、ELISA、直接或間接的PCR法等,其中,直接PCR法靈敏度高。

為保證PCR結(jié)果的準(zhǔn)確性,要預(yù)防非特異性PCR擴(kuò)增和污染,常用的措施是采用熱啟動(dòng)Taq酶和UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)。

化學(xué)修飾Taq酶活性中心被封閉,使得該酶在低溫或常溫沒(méi)有活性,因此在加樣至PCR擴(kuò)增前,不會(huì)產(chǎn)生由于引物錯(cuò)誤配對(duì)而形成的非特異性擴(kuò)增。高溫(如95℃)條件下,化學(xué)修飾基團(tuán)會(huì)水解脫落,釋放全部酶活性,從而實(shí)現(xiàn)Taq酶的熱啟動(dòng)。最大程度降低非特異擴(kuò)增和引物二聚體的形成,提高擴(kuò)增靈敏度和特異性。

UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)能選擇性水解斷裂含有dU的單鏈或雙鏈 DNA中的尿嘧啶糖苷鍵,形成有缺失堿基的DNA鏈,在堿性條件及高溫下會(huì)進(jìn)一步水解斷裂,從而被消除。本產(chǎn)品選擇UDG酶,最佳活性溫度為50℃,95℃滅活。

本產(chǎn)品含有化學(xué)修飾熱啟動(dòng)酶的2×PCR mix,配以dUTP和UDG酶,可最大程度降低非特異擴(kuò)增和引物二聚體的形成,有效防止PCR產(chǎn)物的交叉污染。同時(shí)在PCR管中預(yù)先加入上樣Loading Dye成份,使PCR前加樣處理及后續(xù)電泳上樣變的更方便,以達(dá)到準(zhǔn)確檢測(cè)支原體污染,重復(fù)性好,可信度高。