請先確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)實驗方案是否需要對血清進(jìn)行熱滅活。一般不建議熱滅活,熱滅活處理會損失血清中部分營養(yǎng)成分,并且容易發(fā)生蛋白質(zhì)聚集沉淀;少數(shù)對補體敏感的實驗需要(如某些免疫學(xué)實驗,腺病毒包裝,某些PS培養(yǎng)等),可酌情使用熱滅活血清。熱滅活方法:血清完全解凍充分搖勻后置于56℃水浴中30min,期間不時晃動均勻。
實驗顯示,熱滅活對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱滅活的血清,會增加沉淀產(chǎn)生的概率,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染。熱滅活過程中局部溫度過高,搖晃不均勻,滅活時間過長,都會造成血清品質(zhì)下降。若非必須,可以不需要做熱滅活這一步。不但節(jié)省時間,更確保血清的質(zhì)量!
血清中含有微量的血紅蛋白,與采集血液過程中血細(xì)胞的破裂數(shù)目有關(guān),只要血紅蛋白的含量在藥典規(guī)定范圍內(nèi),顏色的深淺和血清品質(zhì)無關(guān),不影響細(xì)胞培養(yǎng)。中國藥典規(guī)定血紅蛋白含量≤200mg/L。
所有的ExCell Bio血清都在冰凍狀態(tài)下由干冰運輸,因此您收到時應(yīng)該仍是冰凍狀態(tài)。如果只是部分解凍,F(xiàn)BS仍然可以使用,但是建議先將FBS在冰箱中充分解凍,之后溫和的搖晃搖勻,再移至-10℃及以下進(jìn)行儲存。
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應(yīng)該在2周內(nèi)使用它。
建議血清應(yīng)保存在-10℃及以下。若一次無法用完一瓶,無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。解凍時,建議將血清從冷凍室先移至2-8℃冰箱解凍,再放置于室溫進(jìn)行徹底解凍。請注意,解凍過程中需要經(jīng)常搖晃混合。嚴(yán)禁將FBS在37℃長時時間孵育解凍。