檢測原理:
本實驗采用雙抗體夾心ELISA法??筆rotein A 抗體已包被于酶標(biāo)板上。加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品,樣本、標(biāo)準(zhǔn)品中的Protein A與包被于酶標(biāo)板上的抗Protein A結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,通過洗板,游離的成分被洗去;加入HRP標(biāo)記的抗Protein A 抗體,標(biāo)記了HRP的抗Protein A 抗體會與結(jié)合于酶標(biāo)板上的標(biāo)準(zhǔn)品或樣本中Protein A結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,通過洗板,游離的成分被洗去。加入顯色底物(顯色劑),若反應(yīng)孔中有Protein A,辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑變藍,加終止液變黃。在450nm 處測OD值,Protein A 濃度與OD450值之間呈正相關(guān),可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中Protein A 濃度。
試驗所需自備試驗器材:
1. 酶標(biāo)儀(450nm檢測波長濾光片,570nm或630nm校正波長濾光片)
2. 高精度加液器及一次性吸頭、0.5-10uL, 2-20uL,20-200uL,200-1000uL。
3. 微孔板振蕩器, 雙蒸水或去離子水。